איתור מבני רקמות, נוגדנים, ו פתוגנים על ידי תיוג חיסוני הוא פופולרי, מודרני ומדויק. Immunofluorescence מתייחס תיוג חיסוני עם פלואורסצנטי מוכן נוגדנים שגורמים לזוהר תחת אור UV. בזיהוי ישיר של חיסון פלואורסצנטי, מצע הבדיקה נבדק ישירות עם זוהר נוגדנים, ללא נוגדנים ראשוניים במעלה הזרם או אנטיגנים מלאכותיים.
מהי זיהוי ישיר לחיסון?
ניתן לזהות אנטיגנים ספציפיים לגידול ברקמת הגידול ישירות באמצעות חיסון פלואורסצנטי. לפיכך, ניתן לגלות היכן בגוף הקיים גרור הגיע מ. איתור ישיר של חיסון פלואורסצנטי הוא שיטת אבחון המבוססת על ממצאים באימונולוגיה, צביעה חיסונית ואימונוהיסטוכימיה. המיקוד כאן הוא ביכולתם של נוגדנים להיקשר לאתרים ספציפיים ברקמות או לאנטיגנים בסרום. אתרים אלה הם אפיטופים. באבחון ביוכימי, ישנם נוגדנים מלאכותיים או חיקויים (יחיד: מימטי) המאפשרים תיוג של קשרים אלה של נוגדן-אנטיגן על ידי פלואורסצנטי או רדיואקטיביות. צמידות נוגדנים מלאכותיות למעשה נקשרות לאפיטופים מצד אחד ויש להם סמן פלואורסצנטי במקרה של חיסון פלואורסצנטי מצד שני. זוהי אלטרנטיבה לשימוש בסמנים רדיואקטיביים. המאפיין המיוחד של זיהויים ישירים של חיסון פלואורסצנטי בהשוואה לגילויים עקיפים הוא שהנוגדן הנקשר לאפיטופ של האנטיגן בחומר הנבדק הוא באותו זמן כבר הנוגדן מצומד עם הסמן הפלואורסצנטי. נוגדנים נוספים להתערבות אינם נחוצים לגילוי ישיר. בחיסון פלואורסצנטי, פלואורסצין, אשר זוהר באור UV, ו isothiocyanate פלואורסצין (FITC) משמשים כמו צבעים לבניית צמידי הנוגדנים המלאכותיים. עד כמה שזה קורא קצת מסובך, אבל איתור ישיר של חיסון פלואורסצנטי הוא שיטות סטנדרטיות לרפואה אבחון מעבדה עבור בעיות רפואיות רבות ושונות. נוגדנים המכילים צבע הפלואורסצנטי זמינים מוכנים למכירה.
פונקציה, אפקט ומטרות
גלאי ישיר של חיסון פלואורסצנטי זמין ללימודי רקמות כדי להכתים מבנים ספציפיים ברקמה. אך הם קיימים גם עבור תאים בודדים. שם משחק ציטומטריית זרימה תפקיד גדול. ולבסוף, ישנם מבחני החיסון המורכבים משלבים מוצקים ונוזליים. מחקרי חיסון של רקמות חשובים מעל הכל באונקולוגיה, כלומר בטיפול הרפואי סרטן. ניתן לזהות אנטיגנים ספציפיים לגידול ברקמת הגידול ישירות באמצעות חיסון פלואורסצנטי. בדיקות אלו של דגימות רקמה מגידולים חשובות לעיתים קרובות כדי לגלות היכן בגוף הקיים גרור הגיעו, או גם לצורך גיבוש פסק דין האם גידול שפיר או ממאיר. בחינת תאים בודדים עם זיהוי ישיר של חיסון פלואורסצנטי משמשת למציאת אנטיגנים נגיפיים, אנטיגנים חיידקיים ואפיטופים אחרים. לדוגמא, לומדים אם התאים נגועים בנגיף ובאיזה שלב של מחזור ההדבקה נמצאים התאים. FACS (= מיון תאים מופעל פלואורסצנטי) היא שיטת ציטומטריית זרימה יעילה ביותר בה מופצים תאים שכותרתו פלואורסצנטיים למבחנות שונות בהתאם לסוג הצביעה. שיטה זו חשובה באימונולוגיה, המטולוגיה ו אינפטיולוגיה. מבחני חיסון נגד פלואורסצנציה מאפשרים גילוי ישיר של רעלים סביבתיים, אורגניזמים מהונדסים גנטית ותוספים מסוימים במזון. במערך ניסיוני זה, תמיד יש שלב מוצק ונוזל. רַבִּים פתוגנים, ובכלל זה איידסהגורם לנגיף HI, יכול להתגלות גם ישירות. עם זאת, בעת גילוי זיהומיות ו מחלות אוטואימוניות, המטרה היא לעתים קרובות לאתר נוגדנים ולא אנטיגנים. אלה ההגנה מולקולות מיוצר על ידי הגוף עצמו המערכת החיסונית. גילויים כאלה אינם אז גילוי ישיר על פי ההגדרה המוצגת כאן, מכיוון שהנוגדנים הפלואורסצנטיים אינם מתחברים ישירות לאנטיגנים של הגוף עצמו, אלא לאנטיגנים של מכלול הבדיקה. האנטיגנים הללו של מכלול הניסוי מקשרים בתורם לנוגדנים האנדוגניים. רק בבדיקות איתור ואישור מיוחדות הם זיהויים ישירים של חיסון פלואורסצנטי המשמשים לזיהומים נפוצים, למשל על ידי HI. וירוסים ו כלמידיה. ישנן בדיקות למחלות רבות אחרות. ברוב המצבים, עדיף לגילוי עקיף של נוגדנים מחלות זיהומיות כי הגוף המערכת החיסונית בעל יכולת גאונית לזכור זיהומים קודמים. במצבים אחרים, גילוי ישיר של אנטיגנים וגילוי עקיף של נוגדנים משלימים זה את זה. האחרון מראה כי זיהום התרחש בעבר, ואילו הראשון מספק מידע מדויק יותר על המצב הנוכחי של פעילות הפתוגן.
סיכונים, תופעות לוואי וסכנות
עם זיהוי ישיר של מערכת החיסון, כמו בכל הגילוי הרפואי, מגיעים שני סיכונים: הסיכון לתוצאה חיובית כוזבת והסיכון לתוצאה שלילית כוזבת. תוצאות חיוביות שגויות גורמות לאי נוחות פסיכולוגית ומצוקה גדולה מאוד לחולה. לכן, נהלי בדיקות נוספים מתווספים לתוצאות חיוביות, במיוחד כאשר האבחנה מובילה לשינויים קיצוניים בחיים. הסכנה של תוצאה שלילית כוזבת היא שהמטופל לא ילמד בזמן על האיום על עצמו בריאות ואולי אפילו לבריאות הציבור. לכן, טוב לעשות הרבה מחקר ולהפוך מספר רב של זיהויים ישירים של חיסון פלואורסצנטי מוכנים למכירה ולהציע אותם. יחד עם שיטות איתור ישירות ועקיפות אחרות של מחלות ופתולוגיות, הדבר מגביר את דיוק האבחנה. זיהויים ישירים מבוססים על מצמד הנוגדנים, אשר מצד אחד נקשר לאפיטופים של האנטיגנים ומצד שני גם גורם לקרינה במקביל. מוצר כזה משמש אפוא רק בסוג אחד של הליך בדיקה ואינו משמש לסוגים אחרים של בדיקות. זהו הבדל חשוב, פרוצדורלי מזיהוי עקיף, שבו משתמשים בנוגדנים ראשוניים במעלה הזרם של הנוגדנים הפלואורסצנטיים לקשירת אפיטופ. הצמידה הנוגדנית מתאימה לפיכך לבדיקות שונות. הבדל פרוצדורלי זה נבדל מההבדל הרפואי בין גילוי עקיף של נוגדנים לגילוי ישיר של אנטיגנים.
